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技術干貨:2023ELISA實驗重點注意事項
ELISA試劑盒以其靈敏度較高，特異性好的特點已廣泛用于科研實驗研究，越來越多的科研單位和高校畢業(yè)論文都選擇用ELISA試劑盒作為研究課題。優(yōu)質的試劑，優(yōu)質的儀器和正確的操作方法是保證ELISA試劑盒檢驗結果準確可靠的必要條件。但在實驗中也有很多小細節(jié)會影響到實驗結果，下面就和大家談談實驗室中ELISA試劑盒的注意事項。
1.適宜的溫度
血清標本宜在新鮮時檢測，嚴重溶血標本禁用。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存。在建立ELISA方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時，產物的生成可達頂峰。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，反應板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應，邊上的值會偏高，建議為了客觀的判斷結果，將質控放在非邊緣位置。
2.如何處理
凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存；使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
3.關于采集
血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當?shù)拇倌齽?/span>
4.有效期
通常在沒有開封，有效期為6個月，但根據(jù)實驗需求，試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實驗后1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩(wěn)定的。
恒遠生物ELISA試劑盒指標推薦：
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小鼠白介素17A(IL-17A)ELISA試劑盒
小鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒
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